|
Разнонаправленное изменение концентрации 8-OHdG в слюне при экспрессии HER2 при раке молочной железы 1Омский государственный педагогический университет, 644099, Омск, наб. им. Тухачевского, 14; *e-mail: Olseya-120@mail.ru Ключевые слова: слюна; 8-гидроксидезоксигуанозин (8-OHdG); рак молочной железы; HER2 DOI: 10.18097/BMCRM00236 ВВЕДЕНИЕ Одним из наиболее широко используемых маркеров окислительного повреждения ДНК при диагностике онкологических заболеваний является 8-гидрокси-2-дезоксигуанозин (8-OHdG). Известно, что при раке молочной железы (РМЖ) повышается уровень активных форм кислорода (АФК). Азотистое основание гуанин, входящее в состав нуклеотидов ДНК, является наиболее уязвимым к окислительному повреждению в ДНК. Образование 8-OHdG происходит во время окислительного стресса и воздействия АФК на 2’-деоксигуанозин. В норме 8-OHdG удаляется ферментом человеческой 8-оксогуанин-ДНК-гликозилазой 1 (hOGG1) и должен поступать в свободном виде во внеклеточные жидкости [1]. В недавнем исследовании была показана корреляционная зависимость между низким уровнем 8-OHdG в сыворотке крови и плохим прогнозом больных РМЖ [2]. Изменение концентрации продуктов при АФК-индуцированном повреждении ДНК, к которым относится 8-OHdG, отражает состояние системы антиоксидантной защиты организма, является информативным показателем при анализе текущего состояния пациента, прогнозировании и мониторинге ответа на терапевтическое вмешательство. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ В исследовании случай-контроль приняли участие добровольцы, которые были разделены на 2 группы: основную (РМЖ, n=110, возраст 59±6 лет) и контрольную группу (условно здоровые, n=30, возраст 45±9 лет). Включение в группы происходило параллельно. В качестве критериев включения были приняты: женский пол, возраст 30-80 лет, отсутствие какого-либо лечения на момент проведения исследования, в том числе хирургического, химиотерапевтического или лучевого, отсутствие признаков активной инфекции (включая гнойные процессы), проведение санации полости рта. Критерии исключения: отсутствие гистологической верификации диагноза. Образцы слюны собирали однократно на этапе госпитализации строго до начала лечения. Сбор образцов проводили в стерильные полипропиленовые центрифужные пробирки с завинчивающейся крышкой в объёме 2 мл. Образцы слюны собирали путём сплевывания без дополнительной стимуляции в интервале 8-10 часов утра (время максимальной секреции слюны) натощак после предварительного полоскания полости рта водой. Непосредственно после сбора образцы центрифугировали при 10000 g в течение 10 мин, отбирали 1 мл верхнего слоя, переносили в пробирки типа Эппендорф и хранили при температуре -80°С до проведения анализа. Во всех образцах определяли содержание 8-OHdG методом конкурентного иммуноферментного анализа (CEA660Ge, «Cloud-Clone Corp.», США) на анализаторе Thermo Fisher Multiskan FC («Waltham», США). Объём аликвоты составил 200 мкл. Анализ и расчёт концентрации 8-OHdG (пг/мл) проводили в соответствии с инструкцией производителя. Статистический анализ полученных данных проводили при помощи программы Statistica 10.0 непараметрическим методом с использованием в зависимых группах критерия Вилкоксона, в независимых группах – U-критерия Манна-Уитни. Описание выборки производили с помощью медианы (Ме) и интерквартильного размаха в виде 25-го и 75-го процентилей [LQ; UQ]. Различия считали статистически значимыми при p<0.05. Значения 0.05<p<0.1 рассматривали как статистическую тенденцию. РЕЗУЛЬТАТЫ В слюне добровольцев контрольной группы концентрация 8-OHdG составила 188.3 [89.07; 309.1] пг/мл. При РМЖ содержание 8-OHdG повышается до 235.5 [156.3; 636.2] пг/мл, но это повышение находится на уровне статистической тенденции (р=0.0926). Однако нами показано, что концентрация 8-OHdG существенно зависит от молекулярно-биологического подтипа РМЖ (табл. 1). Так, концентрация 8-OHdG в слюне статистически значимо увеличивалась при нелюминальном РМЖ по сравнению с контрольной группой (р=0.0167).
Далее мы проанализировали распределение концентрации 8-OHdG в слюне в зависимости от наличия/отсутствия экспрессии HER2 (human epidermal growth factor receptor 2; рецептор эпидермального фактора роста, тип 2). Установлено, что при наличии экспрессии рецепторов HER2 концентрация 8-OHdG в слюне значимо выше (393.3 [222.2; 790.8] пг/мл), чем при отсутствии (196.4 [135.7; 337.2] пг/мл) (р=0.0127). Различия с контрольной группой статистически значимы только для подгруппы HER2-положительного РМЖ (р=0.0139). Концентрация 8-OHdG зависит от стадии заболевания, степени дифференцировки клеток и индекса пролиферативной активности Ki-67 при наличии/отсутствии экспрессии HER2 (табл. 2). При HER2(+) РМЖ концентрация 8-OHdG в слюне растёт с увеличением стадии, но уменьшается при низкой дифференцировке и высокой пролиферативной активности. Различия с контрольной группой статистически значимы во всех случаях, кроме подгруппы с низкой пролиферативной активностью, что может быть связано с её малым размером и большим разбросом данных. При этом содержание 8-OHdG в слюне независимо от подгруппы остаётся выше, чем в контрольной группе (табл. 2). Для HER2(-) РМЖ наоборот наблюдается уменьшение концентрации 8-OHdG в слюне на распространённых стадиях РМЖ и при высокой и средней дифференцировке опухоли, а также при высокой пролиферативной активности. При этом концентрация 8-OHdG в слюне в этих подгруппах снижается до значений ниже контрольной группы (табл. 2).
ОБСУЖДЕНИЕ В одном из недавних исследований на примере РМЖ было показано уменьшение содержания 8-OHdG в сыворотке и моче на поздних стадиях заболевания, при лимфоваскулоинвазии, поражении лимфатических узлов, отрицательном статусе по HER2 и высоком индексе пролиферативной активности [2]. Согласно данным, полученным в ходе нашего исследования, было показано уменьшение концентрации 8-OHdG в слюне при HER2(-) статусе пациентов на распространённых стадиях заболевания и высоком уровне Ki-67. В отличие от других исследований, мы наблюдали снижение концентрации 8-OHdG в слюне в подгруппах с высоким индексом пролиферативной активности как при HER2(+), так и при HER2(-) статусе. Также мы обнаружили увеличение содержания 8-OHdG в слюне по мере снижения уровня дифференцировки клеток при HER2(-) статусе РМЖ, что не согласуется с предыдущими исследованиями. Стоит отметить, что уровень концентрации 8-OHdG будет уменьшаться или увеличиваться в зависимости от вида рака. Так он увеличивался при раке лёгких, базальноклеточной карциноме, раке мочевого пузыря, остром лимфобластном лейкозе, колоректальном раке, дисплазии шейки матки высокой степени, печёночно-клеточном раке, раке простаты, желудочно-кишечных метаплазиях и аденокарциноме желудка [2-8]. Уменьшение концентрации 8-OHdG в слюне, по-видимому, связано с одновременной дисфункцией или истощением фермента hOGG1 и активацией антиоксидантной защиты раковых клеток, за счёт повышенной активности антиоксидантных путей, регуляторных факторов и изменения метаболизма аминокислот, проявляющих антиоксидантные свойства (Asp, Gln, Gly, Pro, Tyr) [9-12]. В результате, АФК нейтрализуются, предотвращается окислительное повреждение 2’-деоксигуанозина и как следствие образуется 8-OHdG. В пользу утверждения о снижении циркуляции 8-OHdG за счёт снижения концентрации АФК, обусловленной активацией антиоксидантной системы при РМЖ, говорят данные, полученные в исследовании аминокислотного состава слюны среди пациентов с различными молекулярно-биологическими подтипами РМЖ [12]. Было показано, что уровень свободных аминокислот, обладающих антиоксидантными свойствами, значительно выше среди пациентов с РМЖ по сравнению с контрольной группой. При этом в группе HER2(+) концентрация Asp, Gln, Gly, Pro и Tyr выше, чем в группе HER2(-). Эти данные дополняют результаты, полученные в ходе нашего исследования, так как объясняют снижение концентрации 8-OHdG в группе HER2(+) при низкой дифференцировке и высокой пролиферативной активности раковых клеток за счёт повышения концентрации свободных аминокислот с антиоксидантными свойствами, которые нейтрализуют высокое содержание АФК. СОБЛЮДЕНИЕ ЭТИЧЕСКИХ СТАНДАРТОВ У всех пациентов перед проведением испытания было взято добровольное согласие на участие и обработку персональных данных. Исследования одобрены на заседании комитета по этике БУЗ Омской области «Клинический онкологический диспансер» от 21 июля 2016 г., протокол № 15. ФИНАНСИРОВАНИЕ Исследование выполнено за счёт гранта Российского научного фонда, проект 23-15-00188. КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов ЛИТЕРАТУРА
|
