Контроль качества меченых FITC белков для интерактомных исследований методами капиллярного SDS гель-электрофореза и SPR биосенсором
##plugins.themes.bootstrap3.article.main##
Аннотация
Технология меченых красителем белков имеет очень много областей использования, в том числе и для интерактомных исследований. Целью данной работы была оценка применимости протокола мечения белков флуоресцеин изотиоционатом (изомер I, (FITC)) для белков с небольшой молекулярной массой (12 –15 кДа) путем их ковалентной конъюгации с FITC, а также контроль качества включения метки в белок и сравнительная оценка его способности к белок-белковым взаимодействиям. На примере цитохрома с (12 кДа) было показано, что комбинированное использование методов традиционной спектрофотометрии, капиллярного гель-электрофореза и SPR-анализа позволяет сделать выводы о: а) сохранении способности меченого целевого белка взаимодействовать с белками-партнёрами и белковым материалом тканевых лизатов; б) факте включения метки в белок; в) качестве очистки финального белкового препарата от не прореагировавших с ним свободных молекул красителя.
##plugins.themes.bootstrap3.article.details##
Библиографические ссылки
- Florinskaya, A.V., Ershov, P.V., Mezentsev, Y.V., Kaluzhskiy, L.A., Yablokov, E.O., Buneeva, O.A., Zgoda, V.G., Medvedev, A.E., Ivanov, A.S. (2018) The analysis of participation of individual proteins in the protein interactome formation. Biomeditsinskaya Khimiya, 64(2), 169–174. DOI
- Ershov, P.V., Mezentsev, Y.V., Yablokov, E.O., Kaluzhskiy, L.A., Vakhrushev, I.V., Gnedenko, O.V., Florinskaya, A.V., Gilep, A.A., Usanov, S.A., Yarygin, K.N., Ivanov, A. S. (2019) A Method of Lysate Preparation to Improve the Isolation Efficiency of Protein Partners for Target Proteins Encoded by the Genes of Human Chromosome 18. Biomed. Chem. Res. Methods, 2(1), e00090. DOI
- Ershov, P.V., Mezentsev Y.V., Kopylov, A.T., Yablokov, E.O., Svirid, A.V., Lushchyk, A.Ya., Kaluzhskiy, L.A., Gilep, A.A., Usanov, S.A., Medvedev, A.E. and Ivanov, A.S. (2019) Affinity Isolation and Mass Spectrometry Identification of Prostacyclin Synthase (PTGIS) Subinteractome. Biology (Basel), 8(2), 49. DOI
- Ng, S., Smith, M.B., Smith, H.T., Millett, F. (1977) Effect of modification of individualcytochrome c lysines on the reaction with cytochrome b5. Biochemistry, 16(23), 4975-4978. DOI
- Arrell, M.S., Kálmán, F. (2016) Estimation of protein concentration at high sensitivityusing SDS-capillary gel electrophoresis-laser induced fluorescence detection with 3-(2-furoyl)quinoline-2-carboxaldehyde protein labeling. Electrophoresis, 37(22), 2913-2921. DOI
- Ershov, P.V., Mezentsev, Y.V., Yablokov, E.O., Kaluzhskiy, L.A., Florinskaya, A.V., Gnedenko, O.V., Zgoda, V.G., Vakhrushev, I.V., Raeva, O.S., Yarygin, K.N., Gilep, A. A., Usanov, S. A., Medvedev, A. E., Ivanov, A. S. (2018) Direct Molecular Fishing of Protein Partners for Proteins Encoded by Genes of Human Chromosome 18 in HepG2 Cell Lysate. Russ. J. Bioorg. Chem., 44, 759–776. DOI