Конструирование химерного гена реналазы человека с модифицированным N-концом

##plugins.themes.bootstrap3.article.sidebar##

pdf html html (English)
Опубликован: Sep 30, 2020
DOI: https://doi.org/10.18097/BMCRM00137
Ключевые слова:
сигнальная последовательность; реналаза; экспрессия; клонирование; ПЦР

##plugins.themes.bootstrap3.article.main##

В.И. Федченко
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121, Москва, ул. Погодинская, 10
А.А. Калошин
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121, Москва, ул. Погодинская, 10
Н.И. Козлова
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121, Москва, ул. Погодинская, 10
А.Т. Копылов
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121, Москва, ул. Погодинская, 10
А.Е. Медведев
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121, Москва, ул. Погодинская, 10

Аннотация

Реналаза (RNLS) - недавно открытый белок, который выполняет различные функции внутри и снаружи клеток. Внеклеточная RNLS оказывает защитные эффекты на клетку, действуя, по данным ряда авторов, на свои рецепторные белки, внутриклеточная RNLS проявляет свойства FAD-зависимой оксидоредуктазы (КФ 1.6.3.5). Соотношение внутриклеточных и внеклеточных форм этого белка, а также механизмы и факторы, ответственные за его транспорт из клетки остаются неизвестными. Одним из подходов для изучения этих вопросов может быть создание химерных форм белка с модифицированными фрагментами его аминокислотных последовательностей. В данной работе описан метод конструирования химерного гена RNLS человека, кодирующего RNLS без N-концевого пептида.

##plugins.themes.bootstrap3.article.details##

Как цитировать
Федченко V., Калошин A., Козлова N., Копылов A., & Медведев A. (2020). Конструирование химерного гена реналазы человека с модифицированным N-концом. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 3(3), e00137. https://doi.org/10.18097/BMCRM00137
Выпуск
Том 3 № 3 (2020)
Раздел
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Библиографические ссылки

  1. Xu J., Li G., Wang P., Velazquez H., Yao X., Li Y, Wu Y., Peixoto A., Crowley S., Desir G.V. (2005) Renalase is a novel, soluble monoamine oxidase that regulates cardiac function and blood pressure. J. Clin. Invest, 115(5), 1275–1280. DOI
  2. Medvedev A.E., Veselovsky A.V., Fedchenko V.I. (2010) Renalase, a new secretory enzyme responsible for selective degradation of catecholamines: achievements and unsolved problems. Biochemistry (Moscow), 75(8), 951-958. DOI
  3. Baroni S., Milani M., Pandini V., Pavesi G., Horner D., Aliverti A. (2013) Is renalase a novel player in catecholaminergic signaling? The mystery of the catalytic activity of an intriguing new flavoenzyme. Curr. Pharm. Des., 19, 2540-2551. DOI
  4. Desir G.V., Peixoto A.J. (2014) Renalase in hypertension and kidney disease. Nephrol. Dial. Transplant., 29(1), 22-28. DOI
  5. Moran G.R. (2016) The catalytic function of renalase: A decade of phantoms. Biochim. Biophys Acta, 1864(1),177-186. DOI
  6. 6.Wang Y., Safirstein R., Velazquez H., Guo X.J., Hollander L., Chang J., Chen T.M., Mu J.J., Desir G.V. (2017) Extracellular renalase protects cells and organs by outside-in signalling. J. Cell Mol. Med., 21(7), 1260-1265. DOI
  7. Kolodecik T.R., Reed A.M., Date K., Shugrue C.A., Patel V., Chung S.L., Desir G.V., Gorelick F.S. (2017) The serum protein renalase reduces injury in experimental pancreatitis. J. Biol. Chem. 292(51), 21047–21059. DOI
  8. Wang L., Velazquez H., Chang J., Safirstein R., Desir G.V. (2015) Identification of a receptor for extracellular renalase. PLoS One, 10, e0122932. DOI
  9. Moran G.R., Hoag M.R. (2017) The enzyme: Renalase. Arch. Biochem. Biophys., 632, 66-76. DOI
  10. Milani M., Ciriello F., Baroni S., Pandini V., Canevari G.,Bolognesi M., Aliverti A. (2011) FAD-binding site and NADP reactivity in human renalase: a new enzyme involved in blood pressure regulation. J. Mol. Biol., 411(2), 463-473. DOI
  11. Fedchenko V.I., Buneeva O.A., Kopylov A.T., Veselovsky A.V., Zgoda V.G., Medvedev A.E. (2015) Human urinary renalase lacks the N-terminal signal peptide crucialfor accommodation of its FAD cofactor. International Journal of Biological Macromolecules, 78, 347–353. DOI
  12. Fedchenko V., Kopylov A., Kozlova N., Buneeva O., Kaloshin A., Zgoda V., Medvedev A. (2016) Renalase Secreted by Human Kidney НЕК293Т Cells Lacks its N-Terminal Peptide: Implications for Putative Mechanisms of Renalase Action. Kidney Blood Press Res., 41, 593-603. DOI
  13. Fedchenko V.I., Kaloshin A.A. (2019) A simplified method for obtaining cDNA of low-copy and silent eukaryotic genes using human renalase as an example. Biomedical Chemistry: Research and Methods. 2(2), e00101. DOI
  14. Fedchenko V. I., Kaloshin A.A., Mezhevikina L.M., Buneeva O.A., Medvedev A.E. (2013) Construction of the Coding Sequence of the Transcription Variant 2 of the Human Renalase Gene and Its Expression in the Prokaryotic System. Int. J. Mol. Sci. 14, (6), 12764-12779. DOI
  15. Lee, P.Y., Costumbrado, J., Hsu, C.Y., Kim, Y. H. (2012) Agarose Gel Electrophoresis for the Separation of DNA Fragments. J. Vis. Exp., 62, e3923, DOI
  16. Laemmli, U.K. (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature; 227, 680-685. DOI
  17. Kushner, S. R. (1978). An improved method for transformation of Escherichia coli with ColE1-derived plasmids. In: Genetic engineering (Boyer H.B. and Nicosia S., eds.), p. 17, Elsevier/North-Holland, Amsterdam.
  18. Cohen, S.N., Chang, A.C.Y., Hsu, L. (1972). Nonchromosomal antibiotic resistance in bacteria: genetic transformation of Esherichia coli by R-factor DNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 2110-2114.
  19. Gallagher S., Winston S.E., Fuller S.A., Hurrell J. G.R. (2011) Immunoblotting and Immunodetection. Current Protocols in Cell Biology 52 (1), 6.2.1-6.2.28.
  20. Kopylov A.T., Fedchenko V.I., Buneeva O.A., Pyatakova N.V., Zgoda V.G., Medvedev A.E. (2018) A new method for quantitative determination of renalase based on mass-spectrometry determination of a proteotypic peptide labeled with stable isotopes. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 32(15), 1263-1270, DOI