Простая методика выделения плазмид из Escherichia coli для эффективной химической трансфекции культуры клеток человека

Аннотация

В настоящее время в продаже находится большое количество наборов реагентов, предназначенных для выделения высокоочищенной плазмидной ДНК и последующей трансфекции линий клеток человека. Однако ввиду высокой стоимости и логистических проблем может возникнуть необходимость проводить выделение плазмидной ДНК с использованием только самых простых реактивов и материалов. Мы представляем одну из возможных методик такого выделения, подходящую для повседневного лабораторного применения. Она основывается на хорошо известных принципах и методах очистки плазмидной ДНК, имеет минимальную стоимость, не требует специальных навыков и легко масштабируется. Методика включает стадии щелочного лизиса и очистки с помощью частиц оксида кремния и гель-фильтрации. Плазмиды, выделенные с помощью предложенной методики, трансфицируют клетки эмбриональной почки человека Expi293F не менее эффективно, чем плазмиды, очищенные с использованием специализированного набора реагентов Qiagen plasmid maxi kit ( «Qiagen», США).