Усовершенствование экзонового метода для ускоренного получения кДНК гена реналазы крысы

##plugins.themes.bootstrap3.article.sidebar##

pdf html html (English)
Опубликован: Oct 12, 2023
DOI: https://doi.org/10.18097/BMCRM00201
Ключевые слова:
экспрессия гена; ПЦР; объединение экзонов; экзон; ген реналазы крысы

##plugins.themes.bootstrap3.article.main##

В.И. Федченко
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121 Москва, ул. Погодинская, 10
А.А. Калошин
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121 Москва, ул. Погодинская, 10
А.Е. Медведев
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121 Москва, ул. Погодинская, 10

Аннотация

Усовершенствован ранее разработанный нами метод экзонового клонирования кДНК эукариотических генов для получения кДНК гена реналазы крысы. В отличие от ранее использованного постадийного парного объединения экзонов, в данной работе процедура получения полноразмерной кДНК была сокращена за счет того, что мы использовали объединение сразу четырех соседних экзонов (1-4 и 6-9 гена крысы). Две полученные последовательности (экзонов 1-4 и 6-9) объединяли в полноразмерную кДНК гена реналазы крысы. Синтезированную таким образом кДНК клонировали в прокариотический вектор pET-28a(+) с последующей экспрессией в клетках E. coli. Корректность такого подхода подтверждена путем секвенирования полученной кДНК, которая показала полное (100%) совпадение с нуклеотидной последовательностью базы данных (код доступа GenBankNM_001014167).

##plugins.themes.bootstrap3.article.details##

Как цитировать
Федченко V., Калошин A., & Медведев A. (2023). Усовершенствование экзонового метода для ускоренного получения кДНК гена реналазы крысы. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 6(3), e00201. https://doi.org/10.18097/BMCRM00201
Выпуск
Том 6 № 3 (2023)
Раздел
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Библиографические ссылки

  1. An, X., Lu, J., Huang, J.D., Zhang, X., Chen, J., Zhou, Y., Tong, Y. (2007) Rapid assembly of multiple-exon cDNA directly from genomic DNA. PLoSOne, 2, e1179. DOI
  2. Davies W.L., Carvalho L.S., Hunt D.M. (2007) SPLICE: A technique for generation in vitro spliced coding sequeces from genomic DNA. BioTechniques, 43, 785–789. DOI
  3. Jayakumar, A., Huang, W.-Y., Raetz, B., Chirala, S.S., Wakil, S.J. (1996) Cloning and expression of the multifunctional human fatty acid synthase and its subdomains in Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 14509–14514. DOI
  4. Booth, P.M., Buchman, G.W., Rashtchian, A. (1994) Assembly and cloning of coding sequences for neurotrophic factors directly from genomic DNA using polymerase chain reaction and uracil DNA glycosylase. Gene, 146, 303–308. DOI
  5. Fedchenko, V.I., Kaloshin, A.A., Mezhevikina, L.M., Buneeva, O.A., Medvedev, A.E. (2013) Construction of the Coding Sequence of the Transcription Variant 2 of the Human Renalase Gene and Its Expression in the Prokaryotic System.Int. J. Mol. Sci. v.14, 12764-12779; DOI
  6. Fedchenko, V.I., Kaloshin, A.A. (2019) A simplified method for obtaining cDNA of low-copy and silent eukaryotic genes using human renalase as an the example. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 2(2), 1-7. DOI
  7. Fedchenko, V.I., Kaloshin, A.A., Kaloshina, S.A., Medvedev, A.E. (2021). Expression and Isolation of N-Terminal Truncated Human Recombinant Renalase in Prokaryotic Cells. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 4(3), e00158. DOI
  8. Tersus Plus PCR kit. Retrived June 01, 2023 from https://evrogen.ru/kit-user-manuals/Tersus_PLUS_PK221.pdf