Получение C-концевых последовательностей реналазы-1 и реналазы-2 человека, кодируемых альтернативными экзонами

##plugins.themes.bootstrap3.article.sidebar##

pdf html html (English)
Опубликован: Jun 27, 2024
DOI: https://doi.org/10.18097/BMCRM00228
Ключевые слова:
очистка белка; экспрессия; клонирование; изоформы реналазы RNLS1 и RNLS2; альтернативные экзоны гена RNLS; реналаза (RNLS)

##plugins.themes.bootstrap3.article.main##

В.И. Федченко
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121 Москва, Погодинская ул., д.10
А.А. Калошин
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121 Москва, Погодинская ул., д.10
А.Е. Медведев
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121 Москва, Погодинская ул., д.10

Аннотация

Описан метод получения С-концевых аминокислотных последовательностей, слитых с дигидрофолатредуктазой (DHFR) и специфичных для изоформ реналазы RNLS1 и RNLS2. Он включает синтез нуклеотидных последовательностей альтернативных экзонов RNLS1-9ex и RNLS2-10ex, определяющих различия первичной структуры этих белков, их слияние (т.н. фьюжн) с кодирующей последовательностью DHFR и экспрессию данных генетических конструкций в клетках штамма-продуцента E. Coli Rosetta. В результате хроматографической очистки на колонке, содержащей Ni-сефарозу, были получены высокоочищенные препараты реомбинантных белков ReI-9ex и ReII-10ex с электрофоретической чистотой около 95%.

##plugins.themes.bootstrap3.article.details##

Как цитировать
Федченко V., Калошин A., & Медведев A. (2024). Получение C-концевых последовательностей реналазы-1 и реналазы-2 человека, кодируемых альтернативными экзонами. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 7(2), e00228. https://doi.org/10.18097/BMCRM00228
Выпуск
Том 7 № 2 (2024)
Раздел
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Библиографические ссылки

  1. Xu, J., Li, G., Wang, P., Velazquez, H., Yao, X., Li, Y., Wu, Y., Peixoto, A., Crowley, S., Desir, G.V. (2005) Renalase is a novel, soluble monoamine oxidase that regulates cardiac function and blood pressure. J. Clin. Invest., 115(5), 1275–1280. DOI
  2. Medvedev, A.E., Veselovsky, A.V., Fedchenko, V.I. (2010) Renalase, a new secretory enzyme responsible for selective degradation of catecholamines: achievements and unsolved problems. Biochemistry (Moscow), 75(8), 951-958. DOI
  3. Baroni, S., Milani, M., Pandini, V., Pavesi, G., Horner, D., Aliverti, A. (2013) Is renalase a novel player in catecholaminergic signaling? The mystery of the catalytic activity of an intriguing new flavoenzyme. Curr. Pharm. Des., 19, 2540-2551. DOI
  4. Desir, G.V., Peixoto, A.J. (2014) Renalase in hypertension and kidney disease. Nephrol. Dial. Transplant., 29(1), 22-28. DOI
  5. Moran, G.R. (2016) The catalytic function of renalase: A decade of phantoms. Biochim. Biophys. Acta, 1864(1), 177-186. DOI
  6. Moran, G.R., Hoag, M.R. (2017) The enzyme: Renalase. Arch. Biochem Biophys, 632, 66-76. DOI
  7. Beaupre, B.A., Hoag, M.R., Roman, J., Forsterling, F.H., Moran, G.R. (2015) Metabolic Function for Human Renalase: Oxidation of Isomeric Forms of beta-NAD(P)H that Are Inhibitory to Primary Metabolism, Biochemistry 54(3), 795-806. DOI
  8. Wang, Y., Safirstein, R., Velazquez, H., Guo, X.J., Hollander, L., Chang, J., Chen, T.M., Mu, J.J., Desir, G.V. (2017) Extracellular renalase protects cells and organs by outside-in signalling. J. Cell Mol. Med., 21(7), 1260-1265. DOI
  9. Kolodecik, T.R., Reed, A.M., Date, K., Shugrue, C.A., Patel, V., Chung, S.L., Desir, G.V., Gorelick, F.S. (2017) The serum protein renalase reduces injury in experimental pancreatitis. J. Biol. Chem., 292(51), 21047–21059. DOI
  10. Wang, L., Velazquez, H., Chang, J., Safirstein, R., Desir, G.V. (2015) Identification of a receptor for extracellular renalase. PLoS One, 10, e0122932. DOI
  11. Pointer, T.C., Gorelick, F.S., Desir, G.V. (2021) Renalase: A Multi-Functional Signaling Molecule with Roles in Gastrointestinal Disease, Cells. 10, 2006. DOI
  12. Fedchenko, V.I., Kaloshin, A.A., Mezhevikina, L.M., Buneeva, O.A., Medvedev, A.E. (2013) Construction of the coding sequence of the transcription variant 2 of the human Renalase gene and its expression in the prokaryotic system. Int. J. Mol. Sci.,14(6),12764-1279. DOI
  13. Desir, G.V. (2022) Renalase: discovery, biology, and therapeutic applications. Trans Am Clin Climatol Assoc., 132, 117-125.
  14. Iwakura, M, Kokubu, T, Ohashi, S. (1993) Immunological application of the dihydrofolate reductase handle carrying a small peptide, leucine enkephalin. J. Biochem. 114(6), 885-889. DOI
  15. Fedchenko, V.I., Kaloshin, A.A. (2019) A simplified method for obtaining cDNA of low-copy and silent eukaryotic genes using human renalase as an example. Biomedical Chemistry: Research and Methods. 2(2), e00101.
  16. Lee, P.Y., Costumbrado, J., Hsu, C.Y., Kim, Y. H. (2012) Agarose Gel Electrophoresis for the Separation of DNA Fragments. J. Vis. Exp., 62, e3923. DOI
  17. Fedchenko, V.I., Kaloshin, A.A., Kozlova, N.I., Kopylov, A.T., Medvedev, A.E.(2020) Construction of a chimeric human gene encoding renalase with a modified N-terminus. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 3(3), e00137. DOI
  18. Fedchenko, V.I., Kaloshin, A.A., Kaloshina, S.A., Medvedev, A.E. (2021) Expression and isolation of N-terminal trancated human recombinant renalase in prokariotic cells. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 4(3), e00158. DOI
  19. Laemmli, U.K. (1970) Cleavage of structural proteins during the assemblyof the head of bacteriophage T4. Nature, 227, 680-685. DOI
  20. Fedchenko, V.I., Veselovsky, A.V., Kopylov, A.T., Kaloshina, S.A., Medvedev, A.E. (2022) Renalase may be cleaved in blood. Are blood chymotrypsin-like enzymes involved?, Medical Hypotheses, 165. 110895, DOI
  21. Hernández-Preciado M.R., Morán-Moguel, M.C., Dávalos-Rodríguez, I.P., Enríquez-Barajas, C.M., Valdovinos-Maravilla, J.P., Díaz-Pérez, A.L., Silva-Castro, D.E., González-López, L., Gámez-Nava, J.I., Aceves-Aceves, M,A,, Salazar-Páramo, M. (2019) miRNA-24 Gene Sequence, DHFR -829C-T Genotypes, and Methotrexate Response in Mexican Patients with Rheumatoid Arthritis. Genet. Test Mol. Biomarkers. 23(3), 223-227. DOI