Усовершенствованный способ получения низкомолекулярных субстратов тромбина – п-нитроанилидов пептидов

##plugins.themes.bootstrap3.article.sidebar##

pdf html html (English) Supplementary (English)
Опубликован: Nov 7, 2018
DOI: https://doi.org/10.18097/BMCRM00057
Ключевые слова:
тромбин; адсорбция; Bio-Beads SM-2; твердофазный пептидный синтез; п-нитроанилиды; хромогенные субстраты

##plugins.themes.bootstrap3.article.main##

А.А. Чистов
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121, Москва, Погодинская ул., 10; Институт биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, Москва, ГСП-7, ул. Миклухо-Маклая, 16/10
А.В Таланова
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121, Москва, Погодинская ул., 10
М.В. Мельникова
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121, Москва, Погодинская ул., 10
С.С. Кузнецова
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121, Москва, Погодинская ул., 10
Е.Ф. Колесанова
Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича, 119121, Москва, Погодинская ул., 10

Аннотация

Низкомолекулярные хромогенные субстраты тромбина, п-нитроанилиды защищённых по N-концевой аминогруппе коротких пептидов, получали путём твердофазного пептидного синтеза на полистирол-дивинилбензольном полимере с тритильными группами с предварительно присоединенным к ним остатком п-фенилендиамина. После отщепления от смолы п-аминоанилиды пептидов мягко окисляли до п-нитроанилидов смесью сульфата и персульфата калия. Адсорбция на полимерном носителе Bio-Beads SM-2 с элюцией ацетонитрилом позволила легко отделить полученные п-нитроанилиды пептидов от окислителя и получить препараты хромогенных субстратов тромбина с содержанием целевого вещества не ниже 95% и с выходами 30-40%. Тромбин эффективно катализировал гидролиз полученных субстратов со значением KM в диапазоне 29-134 мкМ и Vmax 0.03-1.16 мкМ/с.

##plugins.themes.bootstrap3.article.details##

Как цитировать
Чистов A., Таланова A., Мельникова M., Кузнецова S., & Колесанова E. (2018). Усовершенствованный способ получения низкомолекулярных субстратов тромбина – п-нитроанилидов пептидов. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 1(4), e00057. https://doi.org/10.18097/BMCRM00057
Выпуск
Том 1 № 4 (2018)
Раздел
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Библиографические ссылки

  1. Semashko T.A., Vorotnikova E.A., Sharikova V.F., Vinokurov K.S., Smirnova Y.A., Dunaevsky Y.E., Belozersky M.A., Oppert B., Elpidina E.N., Filippova I.Y. (2014) Selective chromogenic and fluorogenic peptide substrates for the assay of cysteine peptidases in complex mixtures, Anal. Biochem. 449, 179–187. DOI
  2. Rijkers D.T.S., Adams H.P.H.M., Hemker H.C., Tesser G.I. (1995) A convenient synthesis of amino acid p-nitroanilides; synthons in the synthesis of protease substrates, Tetrahedron, 51(41), 11235–11250. DOI
  3. Loeffen R., Winckers K., Ford I., Jukema J.W., Robertson M., Stott D.J., Lowe G.D. (2014) Associations Between Thrombin Generation and the Risk of Cardiovascular Disease in Elderly Patients: Results From the PROSPER Study, J.Gerontol.A Biol.Sci.Med.Sci. 1758-535X (Electronic), 982–988. DOI : 10.1093/gerona/glu228 DOI
  4. Sheehan J.J., Tsirka S.E. (2005) Fibrin-modifying serine proteases thrombin, tPA, and plasmin in ischemic stroke: A review, Glia 50(4), 340–350. DOI
  5. Walker C.P.R., Royston D. (2002) Thrombin generation and its inhibition: a review of the scientific basis and mechanism of action of anticoagulant therapies, Br. J. Anaesth. 88(6), 848–863. DOI
  6. Backes B.J., Harris J.L., Leonetti F., Craik C.S., Ellman J.A. (2000) Synthesis of positional-scanning libraries of fluorogenic peptide substrates to define the extended substrate specificity of plasmin and thrombin, Nat. Biotechnol. 18(2), 187–193. DOI
  7. Rijkers D.T., Wielders S.J., Tesser G.I., Hemker H.C. (1995) Design and synthesis of thrombin substrates with modified kinetic parameters, Thromb. Res. 79(5-6), 491–499. DOI
  8. Erlanger B.F., Kokowsky N., Cohen W. (1961) The preparation and properties of two new chromogenic substrates of trypsin, Arch. Biochem. Biophys. 95, 271-278. DOI
  9. Kaspari A., Schierhorn A., Schutkowski M. (1996) Solid-phase synthesis of peptide-4-nitroanilides, Int. J. Pept. Protein Res. 48(5), 486-494. DOI
  10. Bernhardt A., Drewello M., Schutkowski M. (1997) The solid-phase synthesis of side-chain-phosphorylated peptide-4-nitroanilides, J. Pept. Res. 50(2), 143-152. DOI
  11. Alsina J., Yokum T.S., Albericio F., Barany G. (1999) Backbone Amide Linker (BAL) Strategy for N(alpha)-9-Fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) Solid-Phase Synthesis of Unprotected Peptide p-Nitroanilides and Thioesters, J. Org. Chem., 64(24), 8761-8769. DOI
  12. Kwon Y., Welsh K., Mitchel, A.R., Camarero J.A. (2004) Preparation of peptide p-nitroanilides using an aryl hydrazine resin, Org. Lett. 6(21), 3801-3804. DOI
  13. Burdick P.J., Struble M.E., Burnier J. (1993) Solid Phase Synthesis of Peptide para -Nitroanilides, Tetrahedron Lett., 34, 2589–2592. DOI
  14. Mergler M., Dick F., Gosteli J., Nyfeler R. (2000) Protected peptide p-nitroanilides by solid-phase synthesis, Lett. Pept. Sci. 7, 1. DOI
  15. Abbenante G., Leung D., Bond T., Fairlie D.P. (2001) An efficient Fmoc strategy for the rapid synthesis of peptide para-nitroanilides, Lett. Pept. Sci., 7, 347–351. DOI
  16. Bio-Beads® SM Hydrophobic and Polar Interaction Adsorbents Instruction Manual. Bio-Rad Laboratories.