Оптимизация иммуноферментного метода для определения цилиарного нейротрофического фактора в слезной жидкости человека

##plugins.themes.bootstrap3.article.sidebar##

pdf html html (English)
Опубликован: Dec 20, 2018
DOI: https://doi.org/10.18097/BMCRM00079
Ключевые слова:
цилиарный нейротрофический фактор; слёзная жидкость; иммуноферментный анализ

##plugins.themes.bootstrap3.article.main##

Т.А. Дружкова
Научно-практический психоневрологический центр Департамента здравоохранения г. Москвы, 115419, Москва, ул. Донская, 43
А.А. Шпак
МНТК “Микрохирургия глаза” им. акад. С.Н. Федорова Минздрава России, 127486, Москва, Бескудниковский бульвар, 59а
К.И. Козлова
МНТК “Микрохирургия глаза” им. акад. С.Н. Федорова Минздрава России, 127486, Москва, Бескудниковский бульвар, 59а
А.А. Яковлев
Научно-практический психоневрологический центр Департамента здравоохранения г. Москвы, 115419, Москва, ул. Донская, 43; Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН, 117485, Москва, ул. Бутлерова, 5А
А.Б. Гехт
Научно-практический психоневрологический центр Департамента здравоохранения г. Москвы, 115419, Москва, ул. Донская, 43
Н.В. Гуляева
Научно-практический психоневрологический центр Департамента здравоохранения г. Москвы, 115419, Москва, ул. Донская, 43; Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН, 117485, Москва, ул. Бутлерова, 5А

Аннотация

Определение цилиарного нейротрофического фактора – ciliary neurotrophic factor (CNTF) в слёзной жидкости (СЖ) человека рутинными лабораторными методами затруднено из-за его низкой концентрации в структурах глаза и недостаточного количества материала для анализа. Были подобраны условия для определения CNTF в СЖ твердофазным методом иммуноферментного анализа (ИФА) на основе набора Human CNTF Quantikine ELISA Kit (“R&D Systems”, США) с использованием автоматического иммуноферментного анализатора ChemWell 2910 Combi (“Awareness Technology Inc.”, США). Предварительная кислотная обработка проб СЖ позволила вдвое повысить концентрацию CNTF. Полностью автоматизированная система проведения анализа и выбор разбавителя с низкой оптической плотностью бланка (0.011) обеспечили линейную зависимость калибровочного графика от 0 до 250 пг/мл с возможностью его использования для расчета концентрации CNTF в области низких значений. Рабочие характеристики оптимизированной тест-системы ИФА (линейность метода, предел обнаружения, воспроизводимость, интерференция матрицы) в указанном диапазоне концентраций соответствовали критериям приемлемости для используемого метода определения. Разведение образцов СЖ в четыре раза, совмещённое с кислотной обработкой проб, оказалось оптимальным для получения стабильных результатов при проведении анализа. В этом случае концентрация CNTF в пробе составляла в среднем 10.4±0.4 пг/мл с коэффициентом вариации 4.2% и близостью определяемых значений к ожидаемым величинам на уровне 104%.

##plugins.themes.bootstrap3.article.details##

Как цитировать
Дружкова T., Шпак A., Козлова K., Яковлев A., Гехт A., & Гуляева N. (2018). Оптимизация иммуноферментного метода для определения цилиарного нейротрофического фактора в слезной жидкости человека. Biomedical Chemistry: Research and Methods, 1(4), e00079. https://doi.org/10.18097/BMCRM00079
Выпуск
Том 1 № 4 (2018)
Раздел
ПРОТОКОЛЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ, ПОЛЕЗНЫЕ МОДЕЛИ, ПРОГРАММЫ И СЕРВИСЫ

Библиографические ссылки

  1. Sleeman M.W., Anderson K.D., Lambert P.D., Yancopoulos G.D., Wiegand S.J. (2000). The ciliary neurotrophic factor and its receptor, CNTFR alpha. Pharm Acta Helv., 74 (2-3), 265-272. DOI
  2. Kang S.S., Keasey M.P., Cai J., Hagg T. (2012). Loss of neuron-astroglial interaction rapidly induces protective CNTF expression after stroke in mice. J Neurosci., 32(27), 9277–9287. DOI
  3. Purser M.J., Dalvi P.S. , Zi C. Wang Z.C., D.D., (2013). The Cytokine Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) Activates Hypothalamic Urocortin-Expressing Neurons Both In Vitro and In Vivo. PLoS One, 8 (4):e61616. DOI
  4. Valter K., Bisti S., Gargini C., Di Loreto S., Maccarone R., Cervetto L., Stone J. (2005). Time course of neurotrophic factor upregulation and retinal protection against light-induced damage after optic nerve section. Invest Ophthalmol Vis Sci., 46 (5), 1748-1754. DOI
  5. Miotke J.A., MacLennan A.J., Meyer R.L. J. (2007). Immunohistochemical localization of CNTFRalpha in adult mouse retina and optic nerve following intraorbital nerve crush: evidence for the axonal loss of a trophic factor receptor after injury. Comp. Neurol. 500, 384-400. DOI
  6. Ji J.Z., Elyaman W., Yip H.K., Lee V.W., Yick L.W., Hugon J., So K.F. (2004). CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. Eur J Neurosci., 19(2), 265-272. DOI
  7. Liu X., Clark A.F., Wordinger R.J. (2007). Expression of ciliary neurotrophic factor (CNTF) and its tripartite receptor complex by cells of the human optic nerve head. Mol Vis., 13, 758-763.
  8. Sarup V., Patil K., Sharma S.C. (2004). Ciliary neurotrophic factor and its receptors are differentially expressed in the optic nerve transected adult rat retina. Brain Res., 1013(2), 152-158. DOI
  9. Wong F.S.Y., Tsang K.K., Lo A.C.Y. (2017). Delivery of therapeutics to posterior eye segment: cell-encapsulating systems. Neural Regen Res. 12(4), 576–577. DOI
  10. Zhang K., Hopkins J.J., Heier J.S., Birch D.G., Halperin L.S., Albini T.A., Brown D.M., Jaffe G.J., Tao W., Williams G.A. (2011). Ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for treatment of geographic atrophy in age-related macular degeneration. Proc Natl Acad Sci U S A., 108(15), 6241-6245. DOI
  11. Birch DG, Bennett LD, Duncan JL, Weleber RG, Pennesi ME (2016). Long-term follow-up of patients with retinitis pigmentosa receiving intraocular ciliary neurotrophic factor implants. Am J Ophthalmol. 170, 10-14. DOI
  12. Chowdhury U.R., Madden B.J., Charlesworth M.C., Fautsch M.P. (2010). Proteome Analysis of Human Aqueous Humor Invest Ophthalmol Vis Sci., 51, 4921-4931, DOI
  13. Okragly A.J., Haak-Frendscho M. (1997). An acid-treatment method for the enhanced detection of GDNF in biological samples. Exp Neurol., 145(2 Pt 1):, 592-596. DOI
  14. Daniel W. Tholen, M.S., Chairholder Martin Kroll, M.D., FACB J. Rex Astles, Ph.D., FACB Albert L. Caffo, Ph.D. Thomas M. Happe, MT(ASCP) Jan Krouwer, Ph.D. Fred Lasky (2003) Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline, 23 (16).
  15. Lasky F.D., Boon D.J. , Eckfeldt J.H., Feldkamp C.S., Hassemer D., Sandy Krishnamurthy S., Long T.A., W.G. Miller, Naito H.K., PhD, Posner A. Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Matrix Effects; Approved Guideline—Second Edition. CLSI document EP14-A2 EP14-A2, 25 (4).
  16. EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline - Second Edition, 24, (25).
  17. Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline EP17-A 24 (34).
  18. Kimata H. (2004). Passive smoking elevates neurotrophin levels in tears. Human & experimental toxicology, 23, 215-217. DOI
  19. Mandel A.L.; Ozdener H.; Utermohlen V. (2011). Brain-derived neurotrophic factor in human saliva: ELISA optimization and biological correlates. Journal of immunoassay & immunochemistry , 32, 18-30. DOI